Sanger测序

服务介绍  Service Introduction

            艾基生物拥有多台ABI 3730XL测序仪,  有近十年的 Sanger 测序经验，针对样品的复杂程度摸索出一系列的解决方案，并且在 Sanger 测序平台的基础上将应用扩展至分子生物学上游的多个领域，包括：SNP 检测，片段分析， SSR/STR 分型， 基因检测， 菌种鉴定， 线粒体测序， 基因组测序，跑板等服务。

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        艾基生物Sanger测序电子订单

平台优势  Service Advantages

        质量稳定：精确读长达 800 bp 以上，有效读长度超过 900 bp。

        准确度高：QV20+ 和 CRL 值 >1000。

        时效性强：日均处理量 >2000 个反应，结果及时、准确，最快 24 小时出结果。

        困难模板：成熟的方案应对 High GC，AT rich，发夹结构，重复序列。

        一站式服务：基因组提取、引物设计、PCR 扩增、Primer Walking、测序及结果分析。

技术流程 Technical Procedures

样品要求 Sample Requirenments

      【菌液和平板】

        需过夜培养的菌液，至少提供 200 ul；无需培养可直接提取的样品，请提供 2-4 ml 过夜培养的菌液；

        样品请注明抗性，常备抗生素：氨苄青霉素 (Amp)、卡那霉素 (Kan)、氯霉素 (Chl)；

        若菌液所含质粒为超低拷贝，请直接提供质粒；

        除大肠杆菌以外的菌液，请直接提供质粒。

        【质粒】

        浓度 >50 ng/ul，总体积不少于 10 ul；

        请确保质粒溶解于灭菌的双蒸水中，TE 溶解的质粒会造成反应失败。

        【PCR 产物】

        已纯化 PCR 产物：请确保 DNA 溶解于灭菌的双蒸水中，浓度 >30 ng/ul，总体积不少于 20 ul。

        未纯化 PCR 产物：请注明片段长度，条带是否单一，原液总体积不少于 20 ul；

        片段 < 100 bp 建议克隆后测序，片段 > 4 kb 建议分段扩增后测序。

        【测序引物】

        浓度 ≥ 5 pmol/ul，总体积不少于 10 ul，并确保溶解于灭菌的双蒸水中；

        测序引物长度尽量控制在 20-30 bp，引物过短或过长均会影响测序质量；

        含兼并碱基荧光标记或修饰的引物不适用于测序。

注意事项  Notes

样品登记表需按要求填写详细，避免问题订单带来的实验延误；

确保样品与登记表名称一致，可包含“字母”“数字”“—”；请避免出现 汉字、拉丁字母及其他特殊字符；

填写“测通”的样品会默认拼接，“双向”测序的样品如需拼接请注明；

如样品为菌液或平板，请注明抗生素类型；

若测序引物不是通用引物，请自备或委托合成，选择引物类型（通用 / 新送 / 已送 / 需合成）并注明浓度；

若送测质粒不是常用载体，通用引物请写明引物全称；

未纯化 PCR 产物若已检测为单一条带，请在订单中注明，可大大提高测序成功率；

存在特殊结构的，如：High GC、AT rich、重复序列、发夹结构请在订单上备注；

大量样品送测时，请使用电子订单，方便核对且不易出错。