A15:因为引物纯度不可能是100%，因此，挑选克隆时，有可能挑选了杂质引物扩增出的PCR产物的克隆。此时，请重新挑选一个克隆测序，会得到正确的结果。如果挑选2 ~ 3个克隆测序情况还没改观，我们会免费重新合成引物并以最快的速度送到您的手里。如进行索赔时，按国际行业惯例，索赔范围限于制品价格范围之内。

A14:不能。因为EB是通过嵌入到核酸的双螺旋间而使其着色的。合成的DNA分子为单链，只有通过自身回折形成局部发夹环结构或链间形成部分双螺旋结构，才能被EB染色。由于不同引物的序列不同，形成双螺旋的能力不同，因此染色能力不尽相同，也就不能根据EB染色带的亮度来对合成的DNA进行定量。

PCR反应失败的原因很多，可以从以下几个方面考虑:引物和模板是否配对，同源性有多大；引物本身是否有立体结构；PCR反应用试剂是否能正常工作；PCR仪是否工作正常；PCR反应条件是否合适；如果一切正常，还无法解决问题时，我们可以免费重新合成引物。

对引物进行电泳一定要使用变性PAGE电泳。由于引物是单链DNA，容易形成复杂的立体结构，因此进行Agarose电泳时，容易出现多条泳带，更无法用Agarose电泳进行定量了。

由于核酸在260nm附近有强吸收，而蛋白质在280nm附近有强吸收，从生物体内提取核酸时，常用A260/A280比值来评价核酸纯度(比值在1.8～2.0之间)，这一判断是基于序列中A、G、C、T所占比例大致相同时的结果。而合成的DNA/RNA则不同，序列很短 (通常在20～30个碱基之间)，其中A、G、C、T各种碱基所占比例很不相同，由于各种碱基的摩尔消光系数不同，因此不同碱基构成的引物的A260/A280比值也不同，例如当序列中C、T碱基的含量高时，该比值会大大低于1.8。所以不能用A260/A280的比值来判断引物的纯度。

没有，5和3末端均为-OH基。如需要加磷酸基团，则需要使用修饰合成增加磷酸化。

实验室方便的作法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的一定浓度的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳,<12个碱基的引物用20%的胶，12-60个碱基的引物用16%的胶，>60个碱基的引物用12%的胶，取0.2OD左右的引物，用尿素饱和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到饱和，上样前加热变性(95oC,2mins)。加入尿素的目的一是变性，二是增加样品比重，容易加样。600V电压进行电泳，一定时间后(约2-3小时)，剥胶，用荧光TLC板在紫外灯下检测带型，在主带之下没有杂带，说明纯度是好的(有时由于变性不充分，主带之上可能会有条带，乃是引物二级结构条带)。

通常在合成长链引物时，试剂的加入量要比短链引物多很多，尤其是大于90bp以上的引物，由于成本的增加，从而导致价格也要增加。

150碱基以下。

1个OD值的Oligo的重量约为33 μg，而每个碱基的平均分子量一般按330道尔顿进行计算。因此， 合成oligo的nmol数一般按以下公式粗略地计算： nmole数=(OD值x33μg)/(碱基数x330)x1000=OD值/碱基数x100如果需要计算合成DNA的精确浓度，请按以下公式进行计算： nmole数=(OD值x1000)/[ (15.3xA#)+(7.4xC#)+(11.8xG#)+(9.3xT#) ]

用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量，测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2-0.8之间(吸光度太高或太低会有较大的误差)。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，取部分溶液稀释到1ml并在1ml标准比色皿中测定其吸光度，即为所测体积的OD值，进而可以计算出母液的OD值。

没有溶解的引物非常稳定，可以在-20℃下保存至少1年，溶解好的引物可以事先稀释为100μmoL/L的储存液，分装数管保存于-20℃冰箱，可以保存至少半年以上（反复多次冻融会降低使用寿命）。使用前，将浓溶液稀释成工作液后进行实验。

我们的合成报告单给出了每OD引物稀释为100μmoL/L（即100pmol/ul）浓度的加水量，您可以根椐您的实验需要加入适量的无核酸酶的双蒸水（PH>6.0）或TE缓冲液（PH 7.5-8.0），开启瓶盖溶解之前最好在3000-4000转/分钟的转速下离心1分钟，防止开盖时引物散失。

纯化方式 详细说明 C18 柱脱盐 又称为简易反相柱，对DNA 有特异性吸附，可被有机溶液洗脱，但不会被水洗脱，因此能有效地去除盐分。 R-PAGE 基于特异或反向层析法, 从合成好的产物中去除失败序列，适于35 个碱基以下的引物。 PAGE 纯化 PAGE 纯化法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，对引物DNA 进行分离，然后从凝胶中回收目的DNA。 HPLC 纯化 HPLC 纯化是使用高效液相色谱的原理，对引物DNA 进行纯化。该方法用于分离纯化或分析时能达到很高的纯度和灵敏度。常用的有离子交换HPLC 和反相HPLC。

目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种,无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。（1） 去保护：加入Deblocking脱去碱基上5'- OH的保护基团 DMT ，获得游离的 5'- OH；（2） 耦合：同时加入活化剂和新的碱基，新的碱基 5'- OH仍然被 DMT 保护，3' 端被活化与溶液中游离的 5'- OH发生耦合反应；（3） 封闭：耦合反应中极少数 5'- OH没有参加反应 ，用封闭试剂终止其后继续发生反应；（4） 氧化：加入氧化剂使其由核苷亚磷酸酯形成更稳定的核苷磷酸酯。合成后处理：切割与脱保护基：将合成好的寡核苷酸链从支持物上化学切割下来…